1. Giới thiệu chung:

NucliSENS EasyQ là hệ thống tự động đầu tiên kết hợp giữa khuếch đại NASBA và phát hiện real-time sử dụng các đầu dò là phân tử Beacon. Hệ thống này được thiết kế đáp ứng yêu cầu xét nghiệm nhanh, nhạy, linh hoạt và thuận tiện phù hợp với các phòng thí nghiệm khác nhau.

Nhạy và tin cậy

- Công nghệ NASBA: khả năng khuếch đại cao

- Phân tử Beacon giúp phát hiện các sản phẩm khuếch đại đặc trưng và nhanh chóng cũng như cho biết ngay lượng sản phẩm tạo ra

- Các ống phản ứng đóng kín giúp giảm đến mức tối thiểu sự nhiễm của các đơn vị khuếch đại (amplicon)

- Mỗi xét nghiệm đều được kiểm chứng bên trong

Linh hoạt:

- Các xét nghiệm có thể được phát triển thông qua kit Nuclisen EasyQ Basic và hỗ trợ từ trang web

- Khuếch đại NASBA là một quá trình đẳng nhiệt cho phép các bước khuếch đại chứa các đoạn đích tăng theo bội số

Nhanh chóng:

- Thời gian khếch đại Real-time NASBA: 60 phút

- Kết quả khuếch đại real-time 48 mẫu trong vòng 1.5 đến 3 gìờ (phụ thuộc vào xét nghiệm

Thuận tiện:

- Thời gian thao tác bằng tay là nhỏ nhất

- Phần mềm dễ dàng sử dụng

- Phù hợp với các phòng thí nghiệm (diện tích đặt máy 42 x 42 cm)

2. Nguyên lý: Khuếch đại NASBA và phát hiện Real-time:

ü Khuếch đại NASBA

Khuếch đại NASBA là trái tim của NucliSENS, dựa trên sự duỗi thẳng của primer và thực hiện quá trình sao chép bởi sự phối hợp hoạt động của ba enzyme. Phản ứng khuếch đại thực hiện tại 410C

Qúa trình khuếch đại diễn ra như sau:

Đầu 3’ của mồi P1 gắn vào trình tự cần phân tích, đầu 5’ của P1 mã hóa cho T7 RNA polymerase promoter.

Sau khi mồi P1 gắn vào, enzym sao mã ngược AWV-RT sẽ gắn vào và cDNA là bản sao của RNA đích được tạo ra.

RNA lai bị thủy phân bởi RNase H làm cho mồi P2 gắn vào, enzyme AWV-RT sẽ liên kết trở lại tạo ra cDNA sợi đôi là bản sao của RNA nguồn cần phân tích với T7 RNA polymerase promoter ở một đầu. Promoter này sau đó sẽ bị nhận ra bởi T7 RNA polymerase và tạo ra một lượng lớn (10 – 100) các sợi đối nghĩa (anti-sense), trình tự RNA sợi đơn bản sao tương ứng với trình tự đích RNA. Các bản sao RNA anti-sense là khuân để thực hiện quá trình khuếch đại .

Sau đó các phân tử Beacon sẽ gắn vào và phát huỳnh quang

Toàn bộ quá trình khuếch đại NASBA sẽ thực hiện ở 410C và lượng khuếch đại sẽ tạo được 109. Với đích là DNA, quá trình khuếch đại vẫn diễn ra như vậy nhưng giai đoạn biến tính nhiệt ban đầu phải thực hiện trước khi thêm enzyme vào hỗn hợp phản ứng (1000C, 5 phút)

Phát hiện phân tử Beacon

Phát hiện Real-time sử dụng phân tử Beacon dựa vào đo tín hiệu huỳnh quang tăng lên theo thời gian. Tín hiệu này chỉ được tạo thành sau khi có liên kết đặc hiệu của phân tử Beacon với một đơn vị sao chép. Sử dụng phương pháp này, số lượng axit nucleic đích trong mẫu được nhân lên trong mối tương quan giữa chất kiểm chứng được thêm vào từ quá trình tách chiết. Quá trình hoàn toàn tự động, không cần bất kỳ bước hút nào sau khi khuếch đại. Thiết bị phân tích NucliSENS EasyQ thực hiện đo và dịch các tín hiệu huỳnh quang này.

Phân tử Beacons

Phân tử Beacon là một loại đầu dò phát hiện ADN, ARN với một cấu trúc vòng đặc biệt và hai đầu có bổ xung cho nhau (cấu trúc kẹp tóc). Chúng được thiết kế như vậy để đoạn vòng của phân tử Beacon có trình tự bổ xung với phân tử axit nucleic đích.

Nhóm huỳnh quang liên kết vào một đầu và nhóm Quencher liên kết vào đầu kia

Trong trường hợp đóng vòng, phân tử Quencher ngăn cản sự phát tín hiệu huỳnh quang. Trong trường hợp mở vòng, khi đầu dò được liên kết bổ xung với trình tự axit nucleic được khuếch đại, Quencher di chuyển ra xa phân tử phát huỳnh quang và kích thích sự phát quang

Phân tử Beacons và EasyQ:

Hai phân tử Beacons được đánh dấu với các chất huỳnh quang khác nhau để có thể đồng thời phát hiện phân tử axit nucleic đích và chất kiểm chứng bên trong. Vì vậy hai đường con tín hiệu huỳnh quang được tạo thành trong suốt 1 gìơ khuếch đại và phát hiện. Một đường cong là tín hiệu của phân tử lai được khuếch đại với kiểm chứng bên trong. Chất kiểm chứng bên trong đưa vào từ giai đoạn phân giải mẫu, có giá trị trong toàn bộ quá trình và được thực hiện cho mỗi mẫu.

3. Thông số kỹ thuật:

Trọng lượng:

20 kg

Kích thước:

420 mm (W) x 420 mm (D) x 220 mm (H)

Tiêu thụ điện áp:

Tối đa : 200 VA., chế độ chờ : 32 VA

Tương thích điện từ :

Đáp ứng các yêu cầu CE - IVD

Thời gian khởi động

5 phút

Nguồn sáng

Đèn Quartz-halogen

Bộ phận phát hiện

Ống nhân quang (Photomultiplier tube)

Môi trường hoạt động :

Độ ẩm : ≤ 80%

Nhiệt độ : 150C đến 300C

Độ cao tối đa : 2000m trên mực nước biển

Phương thức hoạt động :

Bộ phận phân tích đọc tín hiệu huỳnh quang phát ra từ các ống phản ứng trong một môi trường được kiểm soát nhiệt độ sử dụng một hệ thống quang học tiên tiến dựa trên nguồn sáng trọng tâm hoặc trực tiếp. Một phin lọc chuyên biệt được sử dụng cho cả nguồn sáng kích thích và phát ra của phân tử beacon trong xét nghiệm. Phin lọc sẽ được chọn lọc một cách tự động bằng một quy trình xét nghiệm được yêu cầu

Công suất :

8 – 48 mẫu/ lần chạy

Thời gian thực hiện

48 mẫu trong vòng 2 giờ (thời gian khuếch đại là 60 phút)

Máy phân tích (NucliSens EasyQ Analyzer) đọc tín hiệu phát quang từ ống phản ứng trong môi trường được kiểm soát nhiệt độ. Nó có khả năng thực hiện 8 – 48 xét nghiệm/ 1 lần chạy, đáp ứng hoàn toàn nhu cầu của bất kỳ phòng thí nghiệm nào. Tổng thời gian để cho kết quả định lượng là ít hơn 2 giờ cho 48 mẫu.

Máy ủ (Nuclisen EasyQ Incubator): Thực hiện bước trước khuếch đại trong khoảng thời gian ngắn. Nó hoàn toàn tương thích với thanh 8 giếng của máy phân tích, đảm bảo chuyển xét nghiệm một cách dễ dàng.

Phần mềm : Phần mềm linh hoạt dễ dàng sử dụng. Thêm vào đó, phần mềm xét nghiệm chuyên biệt được cung cấp với hóa chất NucliSens EasyQ cho phép kiểm tra tức thời sự khuếch đại của các mẫu riêng rẽ, tự động phân tích dữ liệu và báo cáo các kết quả định lượng của các mẫu.

Máy tính: Hệ thống được trang bị máy tính riêng rẽ sử dụng phần mềm WinX
Máy ly tâm : dùng để spin nhanh các thanh 8 tubes

Đồ tiêu hao: Các thanh 8 tubes được đặt trong môt khay nhựa, dễ dàng vận chuyển